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        奶牛分子育種技術
        β-酪蛋白(A2型)奶?!艾F形記”

        隨著A1、A2牛奶相關知識的宣傳和報道,以及人們對食品安全問題日益關心,A2奶將會更多地受到消費者的青睞。

        開展適合國內具有自主知識產權的A2型β-酪蛋白檢測技術,定向培育具有A2型的荷斯坦優質種公牛和種子母牛,對提升中國乳業行業發展具有重要的意義和推動作用。在分子水平檢測方面,基于測序、酶切分型、Massarray等技術手段可檢測β-酪蛋白不同變體型,每種方法各有利弊(見下表)。而且,目前已公開的國家發明專利都只是針對A1和A2兩種β-酪蛋白進行分型,但由于檢測堿基突變位點單一,容易造成假陽性結果(A2和A3、E、H1、I混淆),并且檢測樣品通量小、成本較高。因此,有必要建立一種準確、快速、低成本的鑒定方法,讓β-酪蛋白不同變體型奶牛“現形”。

        針對上述現有技術,經過仔細的甄別篩選和大量的試驗,山東奧克斯畜牧種業有限公司得到了一種能夠同時檢測β-酪蛋白不同變體型(A1,A2,A3,B,C,E,F,H1,I)的連接酶檢測反應(LDR)步驟及方法已申請發明專利:201710423750.3)。本發明方法的主要思路:結合β-酪蛋白不同變體型對應的突變位點信息,設計引物進行多重PCR擴增出SNP位點所在的目的DNA片段,再針對每個SNP位點設計3條探針引物(2條探針引物分別和突變位點的不同基因型互補,另1條與模板完全匹配),當兩側的探針與目的DNA序列完全互補時鏈接反應才能進行,最后通過測序儀掃描鏈接反應所產生的片段長度,達到同時對不同SNP位點進行檢測的目的。

            本方法以經過直接測序鑒定的β-酪蛋白不同變體型奶牛為檢測對象,都能夠準確地檢出不同變體型,表明本發明的方法準確、重復性高、穩定性強。而且,本方法可一次實驗同時檢測近百份奶牛樣品,檢測樣品通量高、周期短、費用低。